BrdU染色

服務(wù)介紹：

可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)，滲入正在復(fù)制的DNA分子，活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細(xì)胞。同時(shí)結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色。

實(shí)驗(yàn)流程：

1.加破膜液破膜20min；

2.DAPI染核8min；

3.用4%的多聚甲醛固定10min；

4.用純水稀釋鹽酸(鹽酸：純水=1:7)，滴加到爬片上37℃孵育40min；

5.用4%的多聚甲醛固定10min；

6.加3%BSA封閉，孵一抗4℃過夜，PBS沖洗3次；

7.孵二抗50min， PBS沖洗3次；

8.滴加一滴抗熒光淬滅封片劑封片，顯微鏡觀察。

備注：組織樣本的BRDU 染色，可以按照常規(guī)的免疫熒光流程進(jìn)行操作，不需要用鹽酸處理。細(xì)胞樣本的BRDU染色，則需要嚴(yán)格按照以上的步驟進(jìn)行。

送樣運(yùn)輸要求：

1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。

2.石蠟切片常溫保存運(yùn)輸

3.冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸

4.細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

注意事項(xiàng)：

1.BRDU,檢測(cè)之前需動(dòng)物活體注射化學(xué)試劑brdu，細(xì)胞需用化學(xué)試劑brdu處理造模，否則無陽(yáng)性。